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冻干管制作

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冻干管制作

冻干管制作步骤

1.将 菌名+日期 打印成适合冻干管的小纸条,放入冻干管,下面要留有空白,以防菌会把名字挡住。制作松软合适的棉塞,即棉花用牙签固定在冻干管口。

2.灭菌:冻干管+菌名+棉塞,竹签(报纸包裹),胶头滴管(胶头与滴管分开灭菌,分别报纸包裹),滤器,蒸馏水,空100ml三角瓶。

3.保护剂配方1:脱脂牛奶10%(110℃ 10min灭菌)+海藻糖8%(过滤除菌)(都为质量分数),例如配20ml:

①10ml 脱脂牛奶奶粉 2g

②10ml 海藻糖       1.6g         

保护剂配方2:

0.75gTSB + 8g海藻糖 + 5g牛血清白蛋白(BSA Fraction V)+ 100mL去离子水

注:BSA会变性且凝结成块,所以不能高压灭菌,海藻糖也不能灭菌,二者都用0.22μm滤器过滤除菌。

例如,配100mL保护剂,以下物品先进行灭菌:

①0.75gTSB溶于50mL去离子水

②50mL去离子水

③0.22μm滤器

④注射器

灭菌后,5g牛血清白蛋白和8g海藻糖溶解于50mL无菌水中,用0.22μm滤器过滤除菌,加入50mLTSB溶液中。

4.将保护剂用胶头滴管加入新鲜斜面中,用竹签刮菌,震荡均匀。保护剂用量较少,每只冻干管中加0.5ml左右。-20℃预冻5h,-80℃预冻30min。

5.冻干大于24h(根据实际情况确定)。

6.安瓿熔封机调节空气管和天然气管,至蓝色火焰无跳动,火焰较细,一般调好就不要动这两个调节阀门了,将冻干管灼烧拉细。小心不要拉断。

7.抽真空,用安瓿熔封机封口。注意观察压强指示是否为真空。

8. 检测冻干管。